Mutacja genu lipazy ludzkiej lipoproteinowej jako najczęstsza przyczyna rodzinnej chylomikronemii u francuskich Kanadyjczyków czesc 4

Tę mutację można wykryć przez reakcję łańcuchową polimerazy i trawienie restrykcyjne AvaII lub przez hybrydyzację swoistą dla allelu-oligonukleotydu. 15, 16 Mutację stwierdzono na 13 z 14 alleli z haplotypem H1 (Tabela 1). Istnieją cztery allele od pacjentów z Kanady Francuskiej, którzy nie nosili mutacji Gly . Glu188 lub Pro . Leu207. Te allele z nieznanymi mutacjami wiązały się z haplo-typami H1 i H2, a zatem jest prawdopodobne, że istnieją co najmniej dwie dodatkowe rzadkie mutacje leżące u podstaw niedoboru lipazy lipoproteinowej w tej grupie pacjentów z kanadyjskim pochodzeniem francuskim. Częstotliwość mutacji Pro . Leu207 w analizie hybrydyzacji Dot Blot
Figura 2. Figura 2. Hormonowanie specyficzne dla allelu-oligonukleotydu DNA amplifikowanego egzonu 5 od dziewięciu francuskich pacjentów z kanadyjskim niedoborem lipazy lipoproteinowej. DNA przeniesiono w dwóch powtórzeniach na filtry nylonowe i hybrydyzowano z znakowanymi radioaktywnie oligonukleotydami komplementarnymi do sekwencji prawidłowej lub zmutowanej. Nomenklaturę haplotypu genu lipazy lipoproteinowej wyjaśniono w Tabeli 1.
Tabela 2. Tabela 2. Częstotliwość mutacji Gly . Glu188 i Pro . Leu207 wśród 71 probantów z niedoborem lipazy lipoproteinowej, według pochodzenia. W celu określenia częstotliwości mutacji w pozycji 207 zidentyfikowanej u francuskiego kanadyjczyka i innych pacjentów z niedoborem lipazy lipoproteinowej, wykorzystaliśmy reakcję łańcuchową polimerazy do amplifikacji egzonu 5 genu lipazy lipoproteinowej i przeprowadziliśmy hybrydyzację dot blot ze specyficznymi dla allelu oligonukleotydami. Sekwencja sondy oligonukleotydowej specyficznej dla prawidłowego allelu była 5 CATTTACCCGAATGGAG3 , a dla sondy specyficznej dla zmutowanego allelu była 5 CATTTACCTGAATGGAG3 . Autoradiografia (ryc. 2) wyraźnie zidentyfikowała pacjentów homozygotycznych lub heterozygotycznych pod względem substytucji Pro . Leu207. Wyniki analizy 71 probantów zestawiono w Tabeli 2. Wśród 37 pacjentów z francuskiego Kanady (74 allele), mutacja Pro . Leu207 wystąpiła na 54 allelach (73 procent), a mutacja Gly . Glu188 na 16 allelach (22 procent). Łącznie zidentyfikowaliśmy mutacje na 70 z 74 zmutowanych alleli lipazy lipoproteinowej (95 procent) w tej grupie pacjentów z kanadyjskim pochodzeniem francuskim.
Te same eksperymenty przeprowadzono również na próbkach DNA od 34 niepowiązanych pacjentów z 21 różnych przodków innych niż francuski kanadyjski. Stwierdzono, że tylko jeden allel pacjenta mieszkającego w Niemczech ma mutację Pro . Leu207 (Tabela 2). Szczegóły dotyczące pochodzenia tego pacjenta nie mogły zostać ustalone.
Przeprowadzono także hybrydyzacje Dot blot i analizy fragmentów restrykcyjnych w celu określenia częstości mutacji Pro . Leu207 i Gly . Glu188 wśród francuskich kontrolnych osobników z Kanady z hiperlipidemią lub normolipidemią. Jedenaście z 180 kontroli z hiperlipidemią okazało się heterozygotycznymi pod względem mutacji Pro . Leu207, ale mutacja ta nie została znaleziona wśród 170 kontroli z normolipidemią. Brak kontroli niesie mutację Gly . Glu188.
Mutageneza i ekspresja in vitro
Figura 3. Figura 3. Autoradiograf Northern Blot z 10 .g całkowitego mRNA z komórek COS-1 transfekowanych różnymi cDNA
[hasła pokrewne: piperyna forte cena, marpol bolesławiec, szeridan ]